Нарушения интерферонового статуса у больных раком шейки матки

Ключевые слова: интерферон, рак шейки матки, папилломавирусы, вирус простого герпеса

Введение. Система интерферонов относится к числу одной из наиболее быстро реагирующих на патогены факторов неспецифической резистентности, существенно опережающих развитие специфических реакций иммунитета. Она, в отличие от иммунной системы, осуществляет контрольно-регуляторную роль в сохранении генетического постоянства организма. По значимости система интерферона (ИФН) приближается к иммунной, а по универсальности – даже превосходит ее. Это послужило основанием для предложения понятия интерфероновый статус, в которое входят параметры, определяющие состояние интерфероновой системы [2]. Как правило, в норме ИФН-статус характеризуется низкими концентрациями ИФН в сыворотке крови и выраженной способностью клеток крови продуцировать этот полипептид в ответ на адекватную индукцию [1]. Однако при онкологических заболеваниях характер функционирования интерфероновой системы неоднозначен и во многом зависит от типа опухоли, стадии заболевания и многих других факторов.

Известно, что многие вирусы обладают способностью избегать воздействия иммунной системы. Одним из основных механизмов ускользания от иммунного ответа наиболее онкогенных типов ВПЧ (16 и 18) является их выраженная способность при помощи онкобелков Е6 и Е7 подавлять экспрессию ИФН-индуцибельных генов и, тем самым, понижать или блокировать выработку ИФН инфицированными клетками [7,8]. Учитывая вирусную этиологию рака шейки матки (РШМ), при котором, наряду с наличием вирусов папилломы человека (ВПЧ), достаточно часто дополнительно выявляется персистирующая инфекция вирусом простого герпеса серотипа 2 (ВПГ-2), целью нашего исследования явилось сравнительное изучение состояния интерфероновой системы больных РШМ в зависимости от наличия вирусных инфекций.

Материал и методы. Определение уровней сывороточного, спонтанно продуцированного in vitro и ИФН-гамма проведено у 126 больных РШM. Способность к продукции ИФН-гамма определяли после 48-часовой инкубации выделенных в градиенте плотности лимфоцитов периферической крови в концентрации 2млн/мл с митогеном ФГА (10 мкг) в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Спонтанный ИФН получали при тех же условиях без митогенной стимуляции. Активность ИФН определяли титрованием проб на перевиваемой клеточной культуре НЕр-2 (карцинома гортани человека) в отношении вируса энцефаломиокардита (ЕМС). Активность ИФН выражали в МЕ/мл относительно стандартного препарата Реаферона.

О наличии ВПГ-2 персистирующей инфекции судили по уровню Ig антител класса G к gG2 антигену вируса. Тестирование на наличие ДНК последовательностей генома ВПЧ 16 и 18 в соскобах с шейки матки больных РШМ проводилось с помощью полимеразной цепной реакции в Центре медицинской генетики НАН РА (директор – профессор Т.Ф. Саркисян).

Из обследованных 48 больных были инфицированы как ВПЧ (16 и/или 18), так и ВПГ-2, у 40 больных обнаруживались только ВПЧ 16 или 18, 21 больная имели ВПГ-2 инфекцию и у 23 пациенток не выявлялись исследованные вирусы. Для установления показателей нормы аналогичные исследования проведены у 40 практически здоровых женщин. Статистический анализ проведен с использованием критерия Стьюдента, коэффициента корреляции Пирсона и критерию (2.

Результаты и обсуждение. Наиболее простым и доступным суммарным показателем служит количественное определение ИФН в сыворотке крови. Как свидетельствуют данные литературы, ИФН в сыворотке крови здоровых лиц, как правило, не обнаруживается или циркулирует в предельно низких концентрациях [3]. Данные об уровне сывороточного ИФН у обследованных нами больных РШМ различных групп и здоровых лиц представлены в табл.1.

Таблица 1. Уровни сывороточного ИФН у больных РШМ и в контроле (МЕ/мл)

* достоверно ниже по сравнению с I группой
** достоверно ниже в контроле по сравнению с остальными группами
*** разница с показателями больных IV группы достоверна

Согласно таблице, процент женщин с высоким содержанием ИФН в сыворотке крови у больных всех четырех групп был значительно выше, чем в контроле. Наиболее высокий усредненный уровень сывороточного ИФН отмечен у больных I группы, положительных в отношении двух вирусных инфекций (t=12,7; р<0,001), при этом лишь у 6 из 48 больных этой группы уровни ИФН были в пределах нормы. В группе больных РШМ с ВПГ-2 инфекцией (III группа), также отмечен высокий усредненный уровень ИФН по сравнению с контролем (t=4,4; р<0,001), однако он несколько ниже, чем в I группе. Во II группе больных – ВПЧ-положительных – концентрация ИФН в сыворотках была ниже, чем у ВПГ-2 положительных и достоверно отличалась как от показателей в контроле (t=4,7; р<0,001), так и в I группе (t=3,1; р<0,01). В IV группе больных, отрицательных на вирусы, выявлено наименьшее содержание циркулирующего ИФН, значительно сниженное как по сравнению с уровнем в I группе (t=2,98; р<0,02), так и во II (t=2,3; р<0,05) и III (t=2,9; р<0,02). Таким образом, у больных РШМ уровень циркулирующего ИФН значительно повышен по сравнению с практически здоровыми женщинами, при этом степень повышения непосредственно зависит от наличия персистирующих вирусов. Подтверждением этому может служить выявленная нами сильная корреляционная связь между содержанием в сыворотке ИФН, с одной стороны, и специфических антител к ВПГ-2 – с другой (t=0,78; r=0,1) у больных с двойной вирусной инфекцией. Будучи типичным и при этом положительным признаком на начальных стадиях острых вирусных инфекций, повышение уровня циркулирующего ИФН у больных РШМ с длительно персистирующими вирусами, скорее, отражает глубину патологического процесса и может служить неблагоприятным прогностическим показателем. Сходное повышение содержания ИФН в сыворотке, (но аномального, кислотолабильного), отмечено у больных СПИДом с генерализованной лимфоаденопатией, саркомой Капоши, при этом уровень его указывал на высокую вероятность развития клинических симптомов в течение нескольких месяцев [4].

Однако изменение одного из показателей ИФН-статуса необходимо рассматривать не в отдельности, а во взаимосвязи с другими параметрами, нарушения которых могут сопутствовать высоким уровням сывороточного ИФН. Так ИФН-гамма, который продуцируется, в основном, Тh-1-хелперами и естественными клетками-киллерами (ЕКК), является связующим звеном между ИФН- и иммунной системой и одним из ключевых цитокинов иммунных реакций. От степени выработки ИФН-гамма во многом зависят активность ЕКК, экспрессия антигенов II класса гистосовместимости, направленность цитокиновой регуляции, активность макрофагов, уровень рецепторов для Ig и другие показатели иммунологической реакции [5,6]. В этом аспекте нарушения синтеза ИФН-гамма являются одной из причин снижения неспецифического противоопухолевого иммунитета так же, как и прогностическим показателем многих заболеваний, в том числе и онкологических. В связи с этим нами была изучена способность к продукции спонтанного и ФГА-индуцированного ИФН-гамма у больных РШМ и лиц контрольной группы. Результаты представлены в табл. 2.

Таблица 2. Уровни спонтанного и ИФН-гамма у больных РШМ и в контроле

* достоверно относительно контрольной группы,
** достоверно по сравнению с IV группой

Согласно табл. 2, способность к выработке ИФН-гамма во всех группах больных РШМ была выраженно подавлена по сравнению с таковой в контрольной группе (p<0,001). Наиболее низкий синтез этого лимфокина выявлен в группе больных с двойной вирусной инфекцией, который был достоверно ниже как по сравнению с контролем, так и по сравнению с группами больных ВПЧ+(t=3,5; р<0,01) и больными с отсутствием вирусов (t=4,75; р<0,001). Следующей по выраженности угнетения продукции ИФН-гамма оказалась группа больных с наличием только ВПГ-2 инфекции, у которых отмечена тенденция к снижению ИФН по сравнению с ВПЧ+ больными (t=1,8) и достоверное понижение этого показателя относительно такового в группе вирус-отрицательных больных (t=3,2: р<0,01). У ВПЧ-положительных больных уровень ИФН-гамма хотя и был ниже, чем у вирус-негативных больных, однако разница не оказалась статистически значимой. Таким образом, у всех больных РШМ в разной степени страдает продукция ИФН-гамма, что, несомненно, отражается на других взаимосвязанных с этим лимфокином факторах неспецифической и специфической защиты организма. При одновременном воздействии двух вирусов наблюдается выраженный синергизм в угнетении важнейшего лимфокина – показателя как состояния ИФН-системы, так и иммунореактивности. При этом нами выявлена обратная корреляционная зависимость между уровнями продукции ИФН-гамма и специфических антител к антигену вируса генитального герпеса у больных с двойной вирусной инфекцией (r=-0,49).

Третьим немаловажным параметром ИФН-статуса является уровень ИФН, спонтанно продуцированного лимфоцитами крови in vitro. Выработка ИФН выделенными из крови лимфоцитами без дополнительной антигенной или митогенной стимуляции отражает степень активации клеток-продуцентов возможными циркулирующими в крови опухолевыми, инфекционными, аллергическими антигенами. Согласно имеющимся на сегодняшний день данным, уровень спонтанно-продуцированного ИФН на начальных стадиях острых вирусных инфекций коррелирует с содержанием циркулирующего ИФН и является показателем нарушения ИФН-системы [3,4]. В то же время этот тест может служить контролем для изучаемой в тех же условиях митогенной продукции лимфоцитами ИФН-гамма. Согласно полученным данным (табл.2), уровни спонтанно-продуцированного ИФН у больных РШМ всех обследованных групп были достоверно выше по сравнению с контролем (р<0,01). При этом наибольший уровень спонтанного ИФН отмечен у больных с ВПГ-2 инфекцией, что, возможно, является следствием частой антигенной стимуляции in vitro иммунокомпетентных клеток персистирующим вирусом и, наряду с повышением уровня специфических антител к ВПГ-2, может служить дополнительным показателем активации вирусного генома при РШМ. Не совсем ожидаемой оказалась продукция лимфоцитами больных с сочетанной вирусной инфекцией спонтанного ИФН: уровень ИФН был ниже, чем у ВПГ-2 или ВПЧ-положительных больных, и почти равнялся уровню митогениндуцированного ИФН-гамма в этой же группе больных. Вероятно, активированные in vivo различными сывороточными антигенами лимфоциты теряют способность отвечать на адекватную стимуляцию. При этом наличие сочетанной или одной вирусной инфекции не оказывало существенного влияния на синтез спонтанного ИФН по сравнению с группой больных, не имеющих изучаемых вирусов.

Таким образом, нами установлено, что у больных РШМ по сравнению с практически здоровыми женщинами подавлена продукция ИФН-гамма при повышенных фоновых уровнях спонтанного и циркулирующего в сыворотке ИФН. Причем, наиболее выраженными эти нарушения были у больных с двойной (ВПЧ+ВПГ-2) инфекцией и у больных, положительных только на ВПГ-2, что позволяет предположить, что углубление дефектов интерфероновой системы в большей мере обусловлено персистирующим вирусом простого герпеса-2.

Тесные связи системы интерферона и иммунитета позволяют рассматривать интерферон как важнейший физиологический модулятор иммунитета, а нарушения выработки интерферонов не могут не повлиять на регуляцию и направленность иммунного ответа. Учитывая особенности и характер выявленных нами нарушений ИФН-статуса у отдельных групп больных, различающихся по вирусологическому профилю, и возможного влияния дисбаланса выработки цитокинов на течение и исход патологического процесса, включение в схему традиционной терапии больных раком шейки матки иммуномодулирующих, противовирусных препаратов может способствовать нормализации иммунного статуса и повышению клинической эффективности лечения.

Литература

1. Ершов Ф.И. Анализ интерферонового статуса и цитокинового профиля у больных с генитальным герпесом. Иммунология, 2002, 2, с. 167–174.
2. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. М., 1996, 240 с.
3. Тазулахова Э.Б., Сорокин А.М. Взаимоотношения между системами интерферона и иммунитета. В кн.: Система интерферона в норме и при патологии. М., 1996, с. 88–98.
4. Щегловитова О.Н., Орлова Т.Г. Новое о кислотолабильном альфа-интерфероне. Вопр.вирус., 1999, 2, с. 52–54.
5. Konya J., Dillner J. Immunity to oncogenic human papillomavirus, Adv.Cancer Res., 2001, 82, 205-38.
6. Srivani R., Nagarajan B. A prognostic insight on in vivo expression of interleukin-6 in uterine cervical cancer, Int. J. Gynecol. Cancer, 2003, 13, 3, 331-9.
7. Tindle R.W. Immune evasion in human papillomavirus-associated cervical cancer, Nat. Rev. Cancer, 2002, 2, 1, 59-65.
8. Wang S.S., Hildesheim A. Viral and host factors in human papillomavirus persistence and progression, J. Natl. Cancer Inst. Monogr., Ch. 5: 2003, 31, 35-40.

Вопросы, ответы, комментарии